免疫共沉淀实验 | co-IP | 蛋白相互作用

发布时间 2023-09-28 05:36:17作者: Life·Intelligence

 

Co-IP全称Co-Immunoprecipitation,中文学名免疫共沉淀,是一种以抗体和抗原识别专一性为基础,用于研究蛋白质之间相互作用的经典方法。


通俗点来说,假设我们需要研究样品中A蛋白和B蛋白之间是否存在一些相互作用,首先我们通过合适的方法处理样本,将蛋白提取出来(同时不能破坏蛋白之间的相互作用),然后用预先结合了琼脂糖珠或者磁珠的A蛋白抗体捕获样本中的A蛋白,那么与A蛋白结合的B蛋白也能一起沉淀下来。再将蛋白从珠子上裂解下来,对B蛋白进行检测,能检测到,说明B蛋白在之前的沉淀过程中随着A蛋白一起被拉下来了,进而证明二者之间存在相互关系。

 

各名称解析:
IB:全称immunoblotting,即免疫印迹,也就是常规的Western Blotting,用于显示目的蛋白。
IP:全称immunoprecipitation,即免疫沉淀,这一步主要是为了纯化富集目的蛋白。
Input:全细胞裂解液,含有细胞内所有的蛋白,可认为是阳性组。也就是处理完样本得到的细胞裂解液,在做IP实验之前,需要先跑WB,确认样本中含有蛋白A和蛋白B。
Anti-A:A蛋白的免疫共沉淀抗体
IgG:Anti-A的同型对照抗体,即跟Anti-A同来源同种型,如Anti-A是兔来源IgG型,则同型对照抗体需要选择Rabbit IgG(abs20035)

结果图解析:

该结果是为验证蛋白A与蛋白B是否存在相互作用。本实验一共分为两大组:Input组及IP组,其中IP组又分为IgG组(阴性对照组)和实验组,并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里面是否存在。由Input组的条带可以得到结论:蛋白A与蛋白B都是存在的,证明样本处理提取蛋白的步骤没有任何问题。阴性对照IgG组和实验组平行进行免疫沉淀实验,结果蛋白A与蛋白B均没有条带,说明利用IgG抗体没有把蛋白A和B沉淀下来,证明蛋白A和B与IgG没有结合,排除了蛋白与抗体非特异性结合的可能性;而实验组蛋白A和B均有条带,表示利用蛋白A的抗体进行沉淀实验,成功把蛋白A沉淀下来了,与此同时蛋白B也被沉淀下来,进而得到结论:蛋白A与蛋白B之间存在相互作用。

 

参考: