引物

1，首先需要得到待克隆的基因的CDS序列，上游UTR约250bp，下游UTR约250bp。将上游250bp和CDS序列和下游250bp拼起来，ctrl+C复制。 2，打开Primer Premier 5软件（自行激活），选择DNA Sequence。 3，把序列粘贴到空白面板处，弹出的框框直接点OK ......

1.确定你的目标区域，这里我想PCR来确认我的gRNA是否工作。 所以我需要check我的gRNA在genome上的binding，这是我CRISPick设计的gRNA序列：AGTCGTAGGAGAGTAGGTAC 2. ucsc genome browser，BLAT，browse result， ......

什么是引物 引物（Primer）是一段短的DNA或RNA序列 引物的作用 目标序列扩增：引物用于PCR或RT-PCR反应中，与目标序列的特定区域互补结合。引物的设计使得聚合酶能够在引物的两侧开始合成新的DNA链或互补的RNA链，从而将目标序列扩增出来。 特异性扩增：引物的设计应确保其与目标序列的特定 ......

该软件的使用非常方便，一般使用默认参数就可以出不错的结果。主要分为以下几步： 起始：在之前设置的虚拟环境中创建一个项目文件夹。以后我将把这个项目文件夹称为 SWGA_FOLDER（但您可以而且应该为您的项目命名一个合适的名称！） $ mkdir SWGA_FOLDER $ cd SWGA_FOLDE ......